产品货号:
RFT081
中文名称:
10×BalbBlot快速转膜液
英文名称:
10×BalbBlot Rapid Transfer buffer
产品规格:
500ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
10×BalbBlot快速转膜液使用独特配方,能高效快速地将蛋白转移到印迹膜(PVDF或硝纤膜)上。使用湿转法或半干转法方法,能在10~40分钟内完成转膜过程。
- 快速和环保:快速转膜液不使用甲醇,减轻了对实验者和环境的伤害。
- 兼容性好:快速转膜液能兼容Laemmli胶,预制胶,Bis-Tris胶等多种凝胶。
- 转移效率高:快速转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率,有效解决了大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题。
组分 | 规格 |
10×BalbBlot快速转膜液 | 500mL |
说明书 | 1份 |
保存:2~8℃,有效期1年。
6~10张裁好的普通滤纸或Whatman 3MM滤纸;裁好的转印膜;足够的1×快速转移buffer;无水甲醇(处理PVDF膜用)
- 湿转法(Tank blot):
- 按照下表配制1×快速转膜液
成分 用量 10×快速转膜液 100mL 无水乙醇 200mL 超纯水 700mL - 将滤纸和海绵浸泡在1×快速转膜液中,完全浸湿,平衡5分钟。
- PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒,随后浸泡在1×快速转膜液中,完全浸湿,平衡5分钟;NC膜无需处理,直接浸泡在转膜缓冲液中。
- 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟,去除胶表面的SDS;随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。
- 水中漂洗时间一定不能超过2分钟,否则分子量较大的蛋白不能完全转移。
- 按照以下顺序做好转印三明治结构:
负极(阴极)→一块海绵→滤纸(3张)→凝胶→转印膜→滤纸(3张)→一块海绵(据三明治厚度选择使用与否)→正极(阳极)- 要彻底清除三明治结构中的气泡,适当补加1×快速转膜液保持三明治结构湿润。
- 三明治结构的制作不能太紧,也不能太松。太紧和太松都会影响转印效果。如果太紧的话,可以去除阳极一侧的海绵。
- 要彻底清除三明治结构中的气泡,适当补加1×快速转膜液保持三明治结构湿润。
- 将三明治结构放于转移槽中,转印槽中灌满1×快速转膜液。
- 湿转推荐使用恒流转移:
电流 转移时间 电压变化 300 mA 30~35min 50-55V 350 mA 25~30min 55-58V 375 mA 20~25min 58-62V 400 mA 15~20min 58-65V
- 按照下表配制1×快速转膜液
- 半干转(Semi-dry blot):
- 按照下表配制1×快速转膜液:
成分 用量 10×快速转膜液 50mL 无水乙醇 100mL 超纯水 350mL - 将滤纸浸泡在1×快速转膜液中,完全浸湿。
- PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒,浸泡在1×快速转膜液中,完全浸湿,平衡5分钟。NC膜无需处理,直接浸泡在转膜缓冲液中。
- 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟,去除胶表面的SDS;随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。
- 水中漂洗时间不能超过2分钟,否则分子量较大的蛋白可能不能完全转移。
- 按照以下顺序做好转印三明治结构:
负极(阴极)→下层滤纸(5张)→凝胶→转印膜→上层滤纸(5张)→正极(阳极)- 半干转时,滤纸、胶、膜之间的大小,一般是下层滤纸>=膜>=胶>=上层滤纸。
- 上下两层的滤纸一定不能接触;
- 滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡,接触的滤纸和气泡会造成短路。
- 半干转时,滤纸、胶、膜之间的大小,一般是下层滤纸>=膜>=胶>=上层滤纸。
- 半干转推荐使用恒流转移:
恒电流 转移时间 电压变化 400mA 25~30min 9-13V - 不同厂家半干转仪器设置可能有所不同,请根据厂家说明书适当调整。
- 按照下表配制1×快速转膜液:
问题 | 可能原因 | 解决方法 |
转膜不充分 | 湿转转移槽铂金丝有盐沉积 | 彻底用超纯水清洗转移槽 |
转移膜,滤纸,凝胶没有在1×转移缓冲液中彻底平衡 | 转移膜,滤纸,凝胶要在1×快速转膜液中平衡5分钟,震荡平衡更好 | |
PVDF膜没有用甲醇预处理 | PVDF膜要用甲醇彻底润湿,然后在1×快速转膜缓冲液中平衡5分钟 | |
转膜时间不充分 | 适当延长转膜时间 | |
不连续的转膜 | 凝胶和膜之间有气泡 | 转膜三明治做好后,用滚轴把凝胶和膜之间的气泡赶走 |
PVDF膜没有用甲醇预处理 | PVDF膜要用甲醇润湿,然后在1×快速转膜缓冲液中平衡5分钟 | |
转膜设备不工作 | 电泳电源不配套 | 电泳电源要符合以下参数:300W,5-300V,0.01-3A |
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